讓我們一起來(lái)了解一下亞克隆技術(shù)

　　亞克隆技術(shù)是指在得到基因DNA片段的情況下，對(duì)其進(jìn)行重新克隆，從而對(duì)目的基因DNA進(jìn)行進(jìn)一步的分析或者重組改造等。亞克隆技術(shù)也是分子克隆技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)的出現(xiàn)能夠讓人們對(duì)基因DNA序列有更深入的研究，明確基因的功能，從基因角度對(duì)生物體表型進(jìn)行分析。
　　亞克隆的技術(shù)流程主要分成四個(gè)步驟：目的片段的獲取、酶切載體與目的片段的連接、轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞和鑒定篩選。
　　目的片段的獲取
　　獲得目的片段的方法有以下幾種方法：1、從基因文庫(kù)中直接獲取目的基因片段；2、運(yùn)用PCR技術(shù)，以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄而成cDNA序列，從而得到cDNA文庫(kù)獲取目的基因；3、使用限制性內(nèi)切酶將供體DNA切成許多片段后導(dǎo)入到細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)篩選后得到含有目的基因的細(xì)胞；4、獲得基因序列信息，在體外進(jìn)行人工合成。
　　酶切載體與目的片段的連接
　　選擇適宜的限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)載體目的片段序列進(jìn)行剪切，通常情況下，會(huì)產(chǎn)生對(duì)稱性粘性末端、不對(duì)稱粘性末端和平末端三種情況。亞克隆實(shí)驗(yàn)中優(yōu)先采用的是不對(duì)稱粘性末端連接，可將外源DNA定向插入到載體中。
　　轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞
　　將連接了目的基因的載體轉(zhuǎn)入到細(xì)胞中通常有轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染以及轉(zhuǎn)導(dǎo)兩種方法。轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染是將重組質(zhì)?；蚴删w轉(zhuǎn)入到經(jīng)過(guò)處理的宿主細(xì)胞中；轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法是利用攜帶外源DNA的病毒類侵染宿主細(xì)胞。通常情況下，相比于轉(zhuǎn)化的方法，轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率更高一些。
　　鑒定篩選
　　克隆細(xì)胞的篩選通常選用直接篩選的方法。載體帶有可辨識(shí)的遺傳標(biāo)記，能夠有效的將重組分子與原有細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分和分離。有些載體分子攜帶外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的顏色有明顯變化，如藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，明顯的顏色表型變化能夠讓重組分子得到明確的區(qū)分。除此之外，還有一些其他的藥物篩選方法等，都可以比較簡(jiǎn)單的通過(guò)表型現(xiàn)象對(duì)克隆細(xì)胞進(jìn)行有效的篩選。