DNA抽提和純化方法介紹

     DNA抽提和純化方法介紹：
    一、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb二、甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
    三、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。
    四、異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）五、表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
    六、加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。
    七、堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。
    DNA抽提和純化總的原則：
    1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；
    2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到zui低程度。